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      當(dāng)前位置:首頁  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測試劑盒  -  50T鴨特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書

      鴨特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書

      產(chǎn)品簡介

      氧化氮合成酶(eS)ELISA試劑盒 英文名稱:Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eS ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

      兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit urokinase plasmigen activator,uPA ELISA Kit *

      兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)EL

      更新時間:2021-03-13
      訪問次數(shù):526
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      注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

       產(chǎn)品名稱

       鴨特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書

       規(guī)格

       50T

       貨號

       LZP7851

      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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      實驗過程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
      (分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.99%(GC))Phospho-Ezh2 (Thr311) Antibody式碳酸鋅

      1,二氧六環(huán)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))Oct-4 (V241) Antibody泰妙菌素

      -1,2-標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/g,基體:酸酯)Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb(+)-灰黃霉素

      環(huán)己(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7% (GC))Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb3,二氧噻吩

      9,10-二甲基蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)XBP-1s (E8C2Z) Mouse mAb鋁鎳合金

      3,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ATR Antibody環(huán)基酸頻哪酯

      二環(huán)己(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody炔

      二并噻吩(標(biāo)準(zhǔn)品)Tyrosine Hydroxylase Antibody基酸

      9,10-二基蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα (F6) Mouse mAb二茂鐵甲酸

      反式-1,2-二(標(biāo)準(zhǔn)品)SCD1 (C12H5) Rabbit mAb葉黃素

      3,二氨(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα1 AntibodyD-2,二氨基丁酸

      2,二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPKα1 Antibody T

      2,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb沃來西脫藍(lán)B

      3,二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb溴-2-氟吡啶

      3,5-二酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp72 Antibody甲硫基酸

      對二甲酸二甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Claspin Antibody甲氧基-氟甲

      鄰二甲酸二異酯(標(biāo)準(zhǔn)品)PRSS15/LONP1 (D8W1J) Rabbit mAbBOC-D-4,4'-二基

      (分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC))Survivin (6E4) Mouse mAb三氟酸

      α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒NR2D/NMDAR2D  谷氨酸受體2D200 ul

      α-1/2干擾素(IFN-α1/2)ELISA試劑盒N-Ras  原癌基因100 ul

      S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)ELISA試劑盒NR1D1/REV-ERB alpha  細(xì)胞核受體Rev-Erbα100 ul

      S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)  酸化細(xì)胞核受體Rev-Erbα100 ul

      P選擇素(SELP)ELISA試劑盒Nrf2  核因子2相關(guān)因子2100 ul

      P物質(zhì)受體(TACR1)ELISA試劑盒phospho-Nrf2 (Ser40)  酸化核因子2相關(guān)因子2(Ser40)100 ul

      N-酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒NRF-1  核呼吸因子-1100 ul

      N端前心鈉肽(NT-ProANP)ELISA試劑盒CD303/BDCA-2  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員C100 ul

      N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒CD304/Neuropilin-1  神經(jīng)纖毛蛋白-1100 ul
      鴨特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書兔粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit *

      兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

      兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA試劑盒 英文名稱:Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eS ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

      兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit urokinase plasmigen activator,uPA ELISA Kit *

      兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 英文名稱:Rabbit Urokinase-type Plasmigen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit *

      兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit prothrombin fragment 1+2,F1+2 ELISA Kit 進(jìn)口/原裝小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒      組裝/原裝

      小鼠腺病毒(ADV)ELISA試劑盒      組裝/原裝

      小鼠纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒      組裝/原裝

      小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
      檢測步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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