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      當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家

      鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      溴酚(標(biāo)準(zhǔn)品)FEN-1 Antibody羧基-氟酸

      犬甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒NOS-3/eNOS 一氧化氮合成酶-3(內(nèi)皮型)300 ul

      犬干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒Phospho-eNOS (Ser1177) 酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)

      更新時(shí)間:2021-03-13
      訪問次數(shù):507
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      ?
      注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

       產(chǎn)品名稱

       鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家

       規(guī)格

       50T

       貨號(hào)

       LZP7850

      實(shí)驗(yàn)過程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
      4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
      三、注意事項(xiàng)
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
      2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
      四二二甲(standard for GC,≥99.5%(GC))SHIP2 Antibody二-1,2-二硫環(huán)戊酮

      (分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7%)Phospho-Lyn (Tyr507) AntibodyN-甲基-2-吡咯甲

      茴香(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC))Phospho-Lyn (Tyr507) Antibody甲基-2-環(huán)己-1-酮

      三叔丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Lyn Antibody鹽酸達(dá)波西汀

      間甲酚(標(biāo)準(zhǔn)品)XRCC1 Antibody2-吡咯甲酸甲酯

      (b)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液(5μg/mL,基體:甲)Fes Antibody奎寧環(huán)酮鹽酸鹽

      (k)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.38ug/ml,基體:甲)ATRIP Antibody[5-(二甲基氨酰基)哌啶-基]硫]-6-(1-羥基)-甲基-7-氧代-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2--2-甲酸

      -(標(biāo)準(zhǔn)品)ATRIP Antibody2-羥基喹喔啉

      -(98%)MGMT Antibody5-吲哚甲

      丁基羥基茴香(BHA)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC))NEDD4 Antibody氨甲環(huán)酸

      2,丁二酮(標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))Phospho-MARCKS (Ser152/156) Antibody1-氨基-2-萘酚鹽酸鹽

      甲基叔丁基(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.95%(GC))Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (PE Conjuga)氫化肉桂酸內(nèi)酯

      溴酸(標(biāo)準(zhǔn)品)BLM Antibody4,4'-二氨基-3,3'-二甲基聯(lián)

      (標(biāo)準(zhǔn)品)ISG15 Antibody(2-AMINO-ETHYL)-BENZOIC ACID

      標(biāo)準(zhǔn)溶液(506ug/ml,溶劑:甲)CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (PE-Cy7® Conjuga)鎳鋁合金(1:1)

      正丁基(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))SPINK3 Antibody氨基-2,5-二氟酚

      酸丁酯(BA)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))NEDD8 Antibody化基鈀(II)二聚物

      對(duì)溴酚(標(biāo)準(zhǔn)品)FEN-1 Antibody羧基-氟酸

      犬甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒NOS-3/eNOS  一氧化氮合成酶-3(內(nèi)皮型)300 ul

      犬干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒Phospho-eNOS (Ser1177)  酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)100 ul

      犬泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒Phospho-eNOS (Ser113)  酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)100 ul

      犬兒茶酚抑素(CAT)ELISA試劑盒Phospho-eNOS (Thr495)  酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)300 ul

      犬多肽YY(PYY)ELISA試劑盒Nitric oxide/NO  一氧化氮100 ul

      犬膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒Notch1/MOTC  跨膜受體蛋白Notch-1300 ul

      犬催素(PRL/LTH)ELISA試劑盒Notch3  跨膜受體蛋白Notch-3100 ul

      犬促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒Nox-4/NADH  NADPH氧化酶420 ul

      犬促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒NADPH  還原型輔酶Ⅱ300 ul
      鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗體3-O-Acetylolealic acid中文名:齊墩果酸乙酸酯別名:Olealic acid acetate分子式:C32H50O4

      細(xì)胞周期蛋白3抗體Epifriedelal acetate中文名:別名:分子式:C32H54O2

      DNAJC9蛋白抗體14,17-Epidioxy-28-r-15-taraxerene-2,3-diol中文名:別名:Baccatin分子式:C29H46O4

      DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2抗體2-Epitormentic acid中文名:2-表委陵菜酸別名:分子式:C30H48O5

      DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3L抗體21-Episerratriol中文名:別名:3-Epilycoclaval分子式:C30H50O3

       

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