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      十二指腸鉤口線蟲PCR檢測試劑盒說明書

      產(chǎn)品簡介

      十二指腸鉤口線蟲PCR檢測試劑盒說明書
      上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
      BACE2檢測試劑盒
      適合于帶有臭氧的食品、飲料和飲用水等的細(xì)菌總數(shù)的抗干擾測定用抗臭氧型細(xì)菌平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基

      更新時間:2021-03-14
      訪問次數(shù):591
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      ?
      注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

       產(chǎn)品名稱

       十二指腸鉤口線蟲PCR檢測試劑盒說明書

       英文名稱

       Ancylostoma duodenalePCR

       貨號

       LZP6371

      實(shí)驗(yàn)過程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項(xiàng)
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
      大鼠谷胱甘肽還原酶(GR)elisa試劑盒Anti-CCR2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)  

      大鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira IgG)elisa試劑盒Anti-CCR3 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)菌及病毒  

      大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)elisa試劑盒Anti-CCR3 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞類型標(biāo)志物 表觀遺傳學(xué)  

      大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)elisa試劑盒Anti-CCR3 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞凋亡 淋巴細(xì)胞 t-淋巴細(xì)胞  

      大鼠肝脂酶(HL)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞類型標(biāo)志物 新陳代謝  

      大鼠縫隙連接蛋白α1 43kDa(GJA1)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號 跨膜蛋白  

      大鼠防御素5 elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝 跨膜蛋白  

      大鼠蛋白激酶G(PKG)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)  

      大鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

      大鼠白介素3(IL-3)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

      大鼠C肽(C-Peptide)elisa試劑盒Anti-CCR9 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 表觀遺傳學(xué)  

      大鼠CD45分子(CD45)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)  

      魚腎上腺素(EPI)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué)  

      人神經(jīng)元細(xì)胞說明書Anti-CCR6 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白  

      小鼠成纖維細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-CCS Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 結(jié)合蛋白  

      PALCAM瓊脂基礎(chǔ)26070250g單增李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB4789.30-20/T0005)。

      MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid incubation media MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid

      施氏假單胞菌 /瓶

      腸道菌計數(shù)瓊脂(VRBDA)250g腸道菌計數(shù)和腸桿菌科鑒別

      AgarmediumL

      改良McBride瓊脂培養(yǎng)基  Modified Mcbride Agar Base  250克  單增李氏菌選擇性分離

      Fraser培養(yǎng)基  Fraser Medium  250克  李氏菌的增菌培養(yǎng)

      改良緩沖蛋白胨水  MBPW  250克  李氏菌的增殖

      檸檬酸鹽培養(yǎng)基  Citrate Agar  250克  大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別
      十二指腸鉤口線蟲PCR檢測試劑盒說明書小鼠小腸成纖維細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

      小鼠小腸平滑肌細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

      小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

      小鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

      小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞,MM細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

      小鼠心肌成纖維細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

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