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RT-PCR試劑盒的PCR反應(yīng)及注意事項說明

RT-PCR試劑盒合適的溫度通常在45-68℃之間(預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60-68℃間，也有很高的活性，因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定溫度，進行2StepPCR。RT-PCR試劑盒是為兩步法RT-PCR一步實驗配制的，具有高靈敏度的RT-PCR反應(yīng)系統(tǒng)，可以從極低量的總RNA或poly(A)+RNA合成一鏈cDNA。與PCR反應(yīng)相結(jié)合，可用于檢測稀有基因的表達、從極少量細胞中定量檢測特定mRNA的表達水平、克隆特定基因的cDNA片段等。合理配備與cDNA一鏈合成反...

大鼠肺大動脈平滑肌細胞操作要點

大鼠肺大動脈平滑肌細胞操作要點：1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)...

鼠抗人卵巢癌抗原單克隆抗體注意事項

鼠抗人卵巢癌抗原單克隆抗體注意事項：1.,重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性，導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。保存于-20二對于大多數(shù)抗體是適當?shù)?保存于-80七無明顯優(yōu)勢。冰箱不能為無霜型。這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜）恰恰是應(yīng)該避免的。2.抗體試劑瓶應(yīng)盈于具有最小溫度波動的冰箱區(qū)域.例如朝冰箱后部放置而不是圈于門架上。有些研究人員加入冷凍保護劑甘油達到50%的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點降低至低于-20仁。雖然這對于很多抗體是可接受的，但是只有一小...

人克拉拉細胞蛋白（CC16） elisa檢測試劑盒技術(shù)原理

人克拉拉細胞蛋白（CC16）elisa檢測試劑盒技術(shù)原理:(1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。(2).結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。(3).酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。(4).受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。(5).此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。(6).加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)...

豚鼠免疫球蛋白E（IgE）ELISA免費代測試劑盒操作步驟

豚鼠免疫球蛋白E（IgE）ELISA免費代測試劑盒操作步驟:1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八...

大鼠ADM2ADM2酶聯(lián)檢測試劑盒產(chǎn)品使用過程中常見問題

大鼠ADM2ADM2酶聯(lián)檢測試劑盒產(chǎn)品使用過程中常見問題：1，試劑或者耗材污染，更換試劑，使用一次性耗材，2，洗板出現(xiàn)問題，更換更強配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長洗板時間，3，如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn)，有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應(yīng)，更換包被抗體或二抗，4，使用了過多的抗體，減少抗體使用量，5，二抗產(chǎn)生了非特吸附，減少二抗使用量，縮短二抗反應(yīng)時間，6，顯色液不新鮮，使用現(xiàn)配的顯色液，7，顯色反應(yīng)時間過長沒有終止，控制顯色反應(yīng)時間，及時終止反應(yīng)，8，試劑或者耗材污染，更...

抗人BCS1-like小鼠雜交瘤細胞；1C3C12A2注意事項

抗人BCS1-like小鼠雜交瘤細胞；1C3C12A2注意事項：1)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法...

小鼠趨化因子5elisa檢測試劑盒檢測程序

小鼠趨化因子5elisa檢測試劑盒檢測程序：1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。3.每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在45...