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      當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  熒光-PCR法  -  48T禽白血病病毒(ALV)通用核酸試劑盒廠家

      禽白血病病毒(ALV)通用核酸試劑盒廠家

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      酸化微管相關(guān)蛋白2100 ul

      白介素35(IL-35)ELISA試劑盒Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) 酸化微管相關(guān)蛋白220 ul

      白介素33(IL-33)ELISA試劑盒MAP1A 微管相關(guān)蛋白1A100 ul

      白介素32(IL-32)ELISA試劑盒Talin 踝蛋白

      更新時(shí)間:2021-03-13
      訪問(wèn)次數(shù):857
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      注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

       產(chǎn)品名稱

       禽白血病病毒(ALV)通用核酸試劑盒廠家

       規(guī)格

       48T

       貨號(hào)

       LZP7942

      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
      ?
      實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
      4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
      三、注意事項(xiàng)
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
      2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
      L-色氨 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-氟酮

      Fmoc-纈氨 CrkL (D4G7G) Rabbit mAb-2-氟甲酸

      D-纈氨 Phospho-PLCγ2 (Tyr1217) Antibody氨基-2-氟甲酸

      L-甘氨 Phospho-PLCγ2 (Tyr1217) Antibody2-溴-氟甲

      BOC-L-脯氨 CD133 (A8N6N) Mouse mAb (Flow Specific) (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2--4,6-二甲基嘧啶

      氨基縮二甲 PLCγ2 Antibody2--2-基酮

      絲氨,2-氨基-1, PLCγ2 AntibodyN-芐氧羰基-D-天冬酰

      N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸α-Tubulin (DM1A) Mouse mAb酰氧基*基化銨

      APMSF(進(jìn)分)α-Tubulin (DM1A) Mouse mAb6,11-二氫二并[b,e]氧雜卓-11-酮

      (1R,2S)-1-氨基-2-茚 Phospho-PLCγ2 (Tyr759) Antibody2-溴-5-氟甲

      N-BOC-D-色氨P(pán)hospho-PLCγ2 (Tyr759) Antibody鄰三氟甲氧基

      DL-甘氨 Aurora Antibody Sampler Kit氟甲酸酯

      2-氨基吡啶-甲 JARID1A (D28B10) Rabbit mAb2,二氟甲酸

      甘氨酸-L-亮氨酸 JARID1A (D28B10) Rabbit mAb2,二氟

      雙甘氨二肽CD28 (D2Z4E) Rabbit mAb2-溴-氟甲

      重組人胰島素Phospho-Vimentin (Ser56) AntibodyBOC-L-谷氨酸5甲酯

      人胰島素Phospho-Vimentin (Ser56) Antibody溴-氟甲

      特力利汀;替格列汀Phospho-Vimentin (Ser83) Antibody2,二氟甲

      白介素6(IL-6)ELISA試劑盒phospho-Tau proin (Ser422)  酸化微管相關(guān)蛋白100 ul

      白介素5(IL-5)ELISA試劑盒MAP2  微管相關(guān)蛋白2500 ul

      白介素4(IL-4)ELISA試劑盒Phospho-MAP2 (Ser136)  酸化微管相關(guān)蛋白2100 ul

      白介素35(IL-35)ELISA試劑盒Phospho-MAP2 (Thr1620/1623)  酸化微管相關(guān)蛋白220 ul

      白介素33(IL-33)ELISA試劑盒MAP1A  微管相關(guān)蛋白1A100 ul

      白介素32(IL-32)ELISA試劑盒Talin  踝蛋白100 ul

      白介素3(IL-3)ELISA試劑盒Phospho-Talin (Ser425)  酸化踝蛋白100 ul

      白介素2可溶性受體β鏈(sIL-2Rβ)ELISA試劑盒TBX2/T-box2  新型抑癌基因100 ul

      白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒TBX3  轉(zhuǎn)錄因子Tbx320 ul
      禽白血病病毒(ALV)通用核酸試劑盒廠家周期素B3抗體Homovanillyl alcohol 4-O-glucoside中文名:高香草醇-4-O-葡萄糖苷別名:分子式:C15H22O8

      卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白120抗體Phochinenin I中文名:別名:分子式:C30H28O6

      周期素D結(jié)合蛋白1抗體Visartiside E中文名:別名:分子式:C27H32O11

      卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白23抗體Glyurallin A中文名:別名:分子式:C21H20O5

      卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體p-Hydroxyphenethyl anisate中文名:茴香酸對(duì)羥基苯乙酯別名:分子式:C16H16O4
      檢測(cè)步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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