注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
硬脂酸(Standard for GC,>99%(GC))Myc-Tag (9B11) Mouse mAb2-氨基-3,5-二吡

(Standard for GC,>99.5%（GC))Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb羥基

環(huán)丁砜(標(biāo)準(zhǔn)品)Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb溴芐

環(huán)丁砜(Standard for GC,≥99.5%(GC))Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)1,二甲基脲嘧啶

十四烷(Standard for GC,>99%(GC))Raptor (24C12) Rabbit mAb溴-2-

3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)(standard for GC,≥99.0%(GC))Raptor (24C12) Rabbit mAb5-溴-1H-吡唑[3,B]吡啶

酸三丁酯(standard for GC,>99.5%)SPAK Antibody羥基-酮

三(Standard for GC,>99.5%)DAP1 Antibody5-溴吲哚-甲

三(Standard for GC,≥99.5%(GC))SCD1 (R347) Antibody(S)-1-(2,6-二-氟基)

1,2,3,四氫萘(THN)(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Cathepsin D Antibody吲哚酰

四(Standard for GC,>99.9(GC))Thioredoxin 1 Antibody (Human Specific)2-羥基-2-甲基-1-基-1-酮

三（TFA）(Standard for GC,≥99.5%(GC))LEF1 (C18A7) Rabbit mAb2-硝基咪唑

1,2,三(Standard for GC, ≥99.5% (GC))NUP98 (L205) Antibody噻吩甲酸

四(Standard for GC,≥99.9%(GC))PP5 Antibody3,5-二溴-氨基三氟甲氧基

酸三酯(P)(Standard for GC,>99.7%(GC))PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb鄰三氟甲

三四（TA）(Standard for GC)PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb氧異丁酸

1,3,5-*(Standard for GC, ≥99.0% (GC))NUP98 (P671) Antibody2--5-氟煙酸

三正丁(Standard for GC,≥99.5%(GC))IQGAP1 AntibodyN-Boc-(S)-甲酸哌啶

STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)ELISA試劑盒Ly-6G/Gr-1  淋巴細(xì)胞抗原6G100 ug

Spondin-2 ELISA試劑盒LY-86/MD-1  MD-1蛋白100 ul

SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2(SMOC2)ELISA試劑盒LY-96/MD-2  MD-2蛋白20 ul

SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1(SMOC1)ELISA試劑盒Lysozyme  溶菌酶100 ul

SMAD3 ELISA試劑盒Lyn  膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul

SMAD2 ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr507)  膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul

SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr396)  酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul

SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr497)  酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul

Seryl- tRNA合成酶，細(xì)胞質(zhì)(SARS/SERS)ELISA試劑盒LYVE-1  淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體100 ul
雙歧桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Lactoferrin,LTF/LF ELISA Kit進(jìn)口/分裝

兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA Kit進(jìn)口/分裝

兔腎素(Renin)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Renin ELISA Kit *

兔雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit Dihydro testosterone,DHT ELISA Kit進(jìn)口/分裝

兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Glycated hemoglobin A1c,A1c ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒 英文名稱：Rabbit plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit*小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。