組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Silicone1,3-二溴烷 99%十氫喹啉（順式+反式） 98%

Silicone1,4-二溴丁烷 98%3,3-二乙氧基酸乙酯 95%

Silicone1,5-二溴戊烷 98%2-基-3,3-二苯基烯酸-2-乙基己酯 97%

Silicone1,6-二溴己烷 97%3-乙氧基烯酸乙酯 98%

Silicone2-溴異丁酸乙酯 98%1-乙基哌啶 98%

Silicone溴代異辛烷 99%金雀異黃酮 97%

Dimethylsilicone fluid環(huán)氧溴烷 98%7-羥基-3,4-二氫-2(1H)-喹啉酮 97%

Dimethylsilicone fluid溴代異戊烷 96%1-甲基哌啶 97%

Methylsilicone oil I溴乙酸甲酯 97%1-甲基吡唑 98%

Strontium carbonate溴烷 >99.0%(GC)3-甲基吡唑 98%

Strontium oxalate溴代炔 99%1-甲基吲哚  97%

Nickel1,1,2,2-四溴乙烷 98%α-亞甲基-γ-丁內(nèi)酯 96%

Nickel1,2,3-三溴烷 97%1-甲基吡咯烷 98%

Nickel3-乙酰吡啶 98%1-并咪唑  99%

Nickel2-氨基苯甲酰胺 98%4-甲酰溴 97%

Nickelic oxide2-氨基-4-甲基吡啶 97%2-苯基異丁酸 98%

異酸(S)-(+)-1-(1-萘基)乙酯(>95.0%(GC))Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (HRP Conjugate)IQCC  IQCC蛋白抗體

(S)-(+)-α-甲氧基(>98.0%(GC)(T))Galectin-1/LGALS1 (8A12) Mouse mAbIQCA1  IQCA1蛋白抗體

(R)-(-)-α-甲氧基(>98.0%(GC)(T))Phospho-p130 Cas (Tyr410) AntibodyInvolucrin  囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體

(R)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)(>98.0%(GC)(T))MCM3 AntibodyINTS3  集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體

(S)-(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)(>98.0%(GC)(T))DPP4/CD26 (D6D8K) Rabbit mAb (IHC Formulated)Intra Acrosomal Protein/SP10  頂端體蛋白10抗體

(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰氯(>98.0%(GC))NEDD4L Antibodyintestinal FABP/IFABP  腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體

(-)-α-甲氧基-α-（三氟甲基）苯乙酰氯(>98.0%(GC))Phospho-p130 Cas (Tyr249) AntibodyInterferon alpha 6  干擾素α6抗體

(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)酐(>95.0%(T))CREB (48H2) Rabbit mAb (PE Conjugate)Integrin β2/CD18/LFA-1  整合素β2抗體

(R)-(-)-2-甲氧基-2-(1-萘基)酸(>99.0%(HPLC))Phospho-p130 Cas (Tyr165) AntibodyIntegrin β1/CD29  整合素β1抗體

(S)-(+)-2-甲氧基-2-(1-萘基)酸(>99.0%(HPLC))TCL1 (1-21) Mouse mAbIntegrin beta 7  整合素β7抗體
登革熱病毒ⅢⅣ型分型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格免疫球蛋白j鏈抗體threo-6'-Hydroxyustusolate C中文名：別名：分子式：C23H32O7

誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子配體CD275抗體Intermedin B中文名：別名：分子式：C15H22O2

DNA結(jié)合抑制因子3抗體Bisabola-2,10-diene-1,9-dione中文名：別名：分子式：C15H22O2

肌醇單磷酸酶IMPA3抗體ar-Curcumene中文名：芳姜黃烯別名：α-Curcumene分子式：C15H22

整合素αVβ6抗體1,4-Epidioxybisabola-2,10-dien-9-one中文名：別名：分子式：C15H22O3