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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
AtrazineL-天冬酰胺叔丁酯 95% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

Basta2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸鹽  98%聯(lián)苯三唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%

2iP RibosideN-CBZ-D-氨酸 96%苯達(dá)松 分析標(biāo)準(zhǔn)品

FluridoneN-芐氧羰基-L-氨酸 N-羥基琥珀酰亞胺酯98%硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%

FlurprimidolL-氨酰-L-氨酰-L-氨基酸甲基酯醋酸鹽 99%硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

GlyphosateBOC-L-Α-氨基吲哚丁酸 97%丁草胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%

Metribuzin(S)-3-氨基-4-苯基丁酸鹽酸鹽 98%丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%,基體:石油

BAZ-N-Me-Ala-OH 98%丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=7%

2-Naphthoxyacetic acid sodium saltH-Ala-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200mesh1% DVB惡蟲威標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%（）

Amid-Thin WH-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh惡蟲威標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%（）

PicloramH-Asn-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%（）

(−)-EpicatechinH-Asn(Trt)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh溴螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:乙酸乙酯

IAAH-Asp(OtBu)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g,100~200 mesh溴螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮

IAAFmoc-D-Ala-Wang resin 100-200mesh, Substitution0.2-1.0mmol/g甲基溴硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液　 100μg/ml,u=3%

1-Naphthyl butyrateFmoc-Arg(Pbf)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB甲基溴硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液　 10μg/ml,u=4%

5′-dFUrdFmoc-Asn(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB蕓苔素內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

鄰二甲苯(for HPLC,≥96.0% (GC))CrkL (32H4) Mouse mAbMyelin Protein Zero  外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體

蚜滅磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)BiP AntibodyMyelin PLP  髓磷酯髓鞘蛋白1抗體

優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 46)Ghrelin (D4K1W) Rabbit mAbMyD88  髓樣分化蛋白抗體

優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 68)Phospho-Pyruvate Dehydrogenase α1 (Ser293) AntibodyMycobacterium human  人結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體

優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 100)PKM1/2 AntibodyMycobacterium bovis  牛結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體

優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 150)NQO1 (A180) Mouse mAbMycobacterium  結(jié)核分枝桿菌抗體

紫尿酸 一合物(97%)Aldolase A AntibodyMYCBP2  MYC結(jié)合蛋白2抗體

酚乙酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Fatty Acid Synthase AntibodyMYBPC3  心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白抗體

正戊酸(標(biāo)準(zhǔn)品)PKM1/2 (C103A3) Rabbit mAbMYBPC1  肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體

酮中乙烯菌核利標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)PKM1/2 (C103A3) Rabbit mAbMYBBP1A/p53 activated protein 2  p53激活蛋白2抗體
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體O-Benzyl-L-serine中文名：O-芐基-L-絲氨酸別名：分子式：C10H133

上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體S-Benzyl-L-cysteine中文名：S-芐基-L-半胱氨酸別名：分子式：C10H132S

T細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體Benzoyl-DL-valine中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸別名：分子式：C12H153

電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體(3R)-(+)-1-Benzyl-3-(tert-butoxycarbonylami)pyrrolidine中文名：(3R)-(+)-1-芐基-3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷別名：分子式：C16H24N2O2

EGF毒素受體7跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體1-Benzyl-5-phenylbarbituric acid中文名：1-芐基-5-苯基酸別名：分子式：C17H14N2O3