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      馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒廠家

      產(chǎn)品簡介

      馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒廠家
      上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
      VPI檢測試劑盒將有利于保證科研實驗的成果,而且有利于完善我國科研試劑的產(chǎn)業(yè)化鏈條

      更新時間:2021-03-14
      訪問次數(shù):389
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      注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

       產(chǎn)品名稱

       馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒廠家

       英文名稱

       Madurella spp.PCR

       貨號

       LZP6946

      實驗過程:
      一、試劑準備
      1. DNA模板
      2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
      4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
      一、 試劑的準備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
      試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
      熒光PCR反應液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應條件
      將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
      組成及試劑配制:
      1、酶標板:一塊(96孔)
      2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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      辛夷脂素GLP-2(Glucagon-like peptide-2)  胰高血糖素樣肽-2蛋白 抗橋粒斑蛋白1IgG

      香蒲新苷ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein )  活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原) 抗橋粒斑蛋白2IgG

      西貝母堿AACT(Alpha-1-Anti-chymotrypsin)  α-1抗胰糜蛋白酶 多能發(fā)育相關基因2IgG

      腺苷AACT protein(Alpha chymotrypsin protein)  胰糜蛋白酶 抗鴨瘟病毒IgG

      仙茅苷ACTH (Adrerticotrophin hormons)(1-39)  促腎上腺皮質激素(1-39)(抗原) TNF-α膜受體/DR3 死亡受體3IgG

      香葉木素ADM 1-52/AM 1-52 (Adremedullin 1-52)  腎上腺髓質素(1-52) 死亡受體4IgG

      標準品Biotin/KLH  生物素偶聯(lián)血藍蛋白抗體

      血根堿Biotin/BSA  生物素偶聯(lián)牛血清白蛋白 腫瘤細胞調亡素/死亡受體5IgG

      柚皮甙二氫查爾酮ACTH (Adrerticotrophin hormons)(18-39)  促腎上腺皮質激素(18-39)(抗原) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶IgG

      熊去氧膽酸SP (Substance P)  P物質(抗原) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶(N端)IgG
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