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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
環(huán)孢霉素 A 溶液 ,10mg/mL1mL品牌Anti-Exportin 5 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

腸道病毒EV70 PCR檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)Anti-EEA1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 干細(xì)胞

破傷風(fēng)桿菌PCR檢測(cè)試劑盒圖片Anti-EPS15 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

小鼠載脂蛋白A1Elisa Kit說(shuō)明書Anti-ECS1/Flotillin 2 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué)

小鼠載脂蛋白BElisa Kit多少錢Anti-phospho-E2F1 (Thr433) 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

豬25羥基維生素D3（25 HVD3）elisa試劑盒Anti-ET-2/Endothelin 2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué)

小鼠表皮生長(zhǎng)因子（EGF）elisa試劑盒Anti-EPHB3/Eph receptor B3 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué)

山羊M型肌酸激酶（CKM）elisa試劑盒Anti-EVC1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) t-淋巴細(xì)胞 表觀遺傳學(xué)

人過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α（PPARGC1）elisa試劑盒Anti-ELAVL4/HuD 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

犬不對(duì)稱二甲基精氨酸（ADMA）elisa試劑盒Anti-ERC1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)

犬Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）elisa試劑盒Anti-EGFLAM/Pikachurin 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

雞HSP90抗體（IgM）elisa試劑盒Anti-EMR1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

猴E選擇素（E-Selectin/CD62E）elisa試劑盒Anti-EPB42/protein 4.2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

人HLAⅡ類組織相容性抗原DPα1鏈（HLA-DPA1）ELSIA 試劑盒Anti-E-Selectin/CD62E 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

人H-ras elisa試劑盒Anti-E1 glycoprotein 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

藥根堿BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor)  腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)（多肽片斷抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體IgG

鹽酸吡格列酮ACA11 peptide  擬南芥ACA11蛋白多肽抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體IgG

鹽酸羅格列酮AHA3 peptide  植物蛋白AHA3抗原（擬南芥） 表皮生長(zhǎng)因子(小鼠)IgG

遠(yuǎn)志山酮ⅢbFGF  堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（多肽抗原） 肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子IgG

乙酰白藜蘆ACE2(Angiotensin converting enzyme 2)  血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原 表皮生長(zhǎng)因子(大鼠)IgG

鹽酸川芎BNP  腦鈉素（多肽抗原） 前列腺素E受體3IgG

標(biāo)準(zhǔn)品BNP/Biotin  生物素化腦鈉素多肽抗體

7-乙基-10-羥基喜BrdU (Bromodeoxyuridine)  溴脫氧尿苷 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗大腸埃希桿菌O6IgG

異土木香內(nèi)酯C5  過(guò)敏毒素C5（補(bǔ)體C5）抗原 抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG

異茴芹素CA125  卵巢癌抗原 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG
馬爾太蟲通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eS-3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克

大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50ku

大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10ku

大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8°C100毫克

大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠尿激酶(UK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克