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      阿留申病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格

      產(chǎn)品簡介

      阿留申病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格
      上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
      PROGR檢測試劑盒
      丁香樹脂醇雙葡萄糖苷
      丁香酸
      3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸

      更新時間:2021-03-14
      訪問次數(shù):688
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      注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

       產(chǎn)品名稱

       阿留申病病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格

       英文名稱

       Aleutian Disease Virus(ADV)PCR

       貨號

       LZP6360

      實驗過程:
      一、試劑準備
      1. DNA模板
      2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
      4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
      一、 試劑的準備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
      試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
      熒光PCR反應液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應條件
      將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
      組成及試劑配制:
      1、酶標板:一塊(96孔)
      2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
      小鼠白三烯D4(LTD4)elisa試劑盒Anti-C3 Antibody研究領域 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉導 激酶和磷酸酶 細胞骨架 細胞外基質

      小鼠阿立新A(Orexin A)elisa試劑盒Anti-C3(Complement C3) Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學

      小鼠T細胞活化連接蛋白(LAT)elisa試劑盒Anti-C4A(Complement C4-A) Antibody研究領域 細胞生物 神經(jīng)生物學 細胞類型標志物

      小鼠GTP酶 KRas elisa試劑盒Anti-C5 Antibody研究領域 信號轉導 激酶和磷酸酶 細胞骨架 細胞外基質

      兔骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa試劑盒Anti-C5 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 轉錄調節(jié)因子 表觀遺傳學

      人膠轉蛋白(TAGLN)elisa試劑盒Anti-C5a-R/C5ar1 Antibody研究領域 心血管 細胞外基質

      人堿性胎兒蛋白(BFP)elisa試劑盒Anti-C5 Antibody研究領域 心血管 發(fā)育生物學 信號轉導 干細胞 細胞骨架

      人甲酰甲硫氨酸(fMet)elisa試劑盒Anti-C7 Antibody研究領域 心血管 發(fā)育生物學 干細胞 細胞骨架

      人激肽釋放酶7(KLK 7)elisa試劑盒Anti-C9 Antibody研究領域 心血管 信號轉導 干細胞 細胞骨架

      人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)elisa試劑盒Anti-C9 Antibody研究領域 心血管 信號轉導 激酶和磷酸酶 細胞骨架

      人基質金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)elisa試劑盒Anti-CA1 Antibody研究領域 心血管 信號轉導 激酶和磷酸酶 細胞骨架

      人活化素受體樣激酶1(ALK1)elisa試劑盒Anti-C9orf72 Antibody研究領域 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶

      人紅細胞生成素(EPO)elisa試劑盒Anti-CA1 Antibody研究領域 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶

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